挂蛋白的作用是什么?
这个问题问得真是时候,昨天刚好在实验室给师兄演示如何挂蛋白以及为什么需要挂蛋白(手动微笑) 先放结论: 正确挂接蛋白是蛋白质研究及蛋白质功能验证的一个重要步骤! (这句话简直是废话....但是是真事儿!) 接下来就简单说说蛋白的挂接方式、原理和影响因素等。
一、怎么挂?(以兔脑蛋白为例) 简单来说就是2步: 结合→融合 二者结合的方式有2种: 自组装形成分子复合体; 通过配体分子进行连接。 三、为什么要挂蛋白?(意义) 这看似是一个疑问句,但其实要表达的是“蛋白是否发生正确的结合”这个命题。那么,这个问题就涉及到两个小问题: ①实验系统能否检测到蛋白的表达; ②蛋白是否能正确的与靶分子结合。 如果这两个问题得到肯定答案,则说明蛋白发生了正确的结合,否则,就需要重新设计实验,调整试剂浓度等等。 在实际工作中,我们往往同时检测蛋白的表达和蛋白的结合情况,以此来判断蛋白功能的实现与否并加以优化。
四、影响蛋白结合的因素有哪些? 影响蛋白结合的因素很多,大致可以分为以下5类: 基因突变; 转录后加工; 剪切修饰; 可溶性与膜导向蛋白; 辅助因子。 五、如何正确设计实验验证蛋白相互作用? 合理的设计实验方案可以让我们事半功倍! 一般来说,我们需要从以下4方面来进行考虑: 实验体系的选择; 实验分子的标记; 对反应的调控; 反应的检测。